Cách thiết lập phòng thí nghiệm tách chiết DNA

Cách thiết lập phòng thí nghiệm tách chiết DNA


Cách thiết lập phòng thí nghiệm tách chiết DNA: Hướng dẫn toàn diện (hóa chất, dụng cụ và các tiện ích khác)

Việc thiết lập một phòng thí nghiệm tách chiết DNA là một việc khá khó khăn đối với những người mới làm quen. Tuy nhiên, nó không phải là một nhiệm vụ lớn nhưng chúng tôi phải lựa chọn tất cả các tiện ích rất cẩn thận. Cần có dụng cụ nào, hóa chất nào và SOP cho các loại mẫu khác nhau để tiến hành là gì, chúng tôi phải thiết lập tất cả những thứ thật chính xác.

Giả sử bạn là người mới đến phòng thí nghiệm tách chiết DNA, bạn chỉ mới bắt đầu thí nghiệm của mình và ở giữa thí nghiệm, bạn nhận ra rằng bạn không có etanol, sau đó thì sao?

và nó có thể xảy ra với người mới.

Đừng lo lắng.

Trong bài viết này, chúng tôi sẽ cung cấp cho bạn hướng dẫn đầy đủ về cách thiết lập phòng thí nghiệm tách chiết DNA. Dụng cụ và thuốc thử được sử dụng trong phòng thí nghiệm là gì và các tiện ích khác là gì?

Ngay từ đầu hãy quyết định mục tiêu của bạn.

Loại tách chiết DNA bạn phải thực hiện cho dù bạn đang thực hiện tất cả các mẫu hay chỉ một loại mẫu.

Nếu bạn muốn tách chiết DNA từ tất cả các loại mẫu sinh học như máu, mô thực vật, phết tế bào da, tải lượng vi khuẩn hoặc mẫu pháp y, có lẽ bạn cần thiết lập nâng cao hơn.

Bây giờ trước tiên hãy hiểu tách chiết DNA là gì.

“Tách chiết DNA là quá trình phân lập hoặc tách chiết DNA từ tế bào hoặc từ các bào quan khác của tế bào.”

Quá trình tách chiết DNA hoàn tất theo các bước sau:

  • Ly giải thành tế bào hoặc màng tế bào.
  • Ly giải màng nhân.
  • Trích xuất DNA từ các mảnh vụn tế bào khác
  • Kết tủa DNA
  • Hòa tan DNA.

Đây là đại cương về chiết xuất DNA, tất cả các bước phải được tuân theo trong bất kỳ loại quy trình tách chiết DNA nào.

Để biết thêm chi tiết về tách chiết DNA và các loại phương pháp tách chiết DNA, hãy đọc bài viết của chúng tôi: Các loại phương pháp tách chiết DNA

Hình ảnh phát thảo chung về cách chiết xuất dna từ tế bào

Hình ảnh đại diện cho phác thảo chung về cách chiết xuất DNA từ tế bào.

Bài báo này chứa tất cả thông tin về tách chiết DNA và các loại phương pháp khác nhau được sử dụng trong tách chiết DNA.

Ngoài ra, bài viết đang thịnh hành trên Google. Nó là một trong những bài báo được tìm kiếm nhiều nhất.

chúng tôi giả định rằng phòng thí nghiệm tách chiết DNA của chúng tôi dành cho tất cả các loại mẫu.

Chúng tôi cần ba loại tiện ích cho điều đó:

  1. Hóa chất
  2. Dụng cụ
  3. Đồ nhựa và đồ thủy tinh

Hóa chất  cho phòng thí nghiệm tách chiết DNA:

Chất tẩy rửa và muối là những lựa chọn tốt nhất để ly giải tế bào. CTAB, SDS, NaCl, KCl, Tris và EDTA là một số hóa chất phổ biến cần phải có để tách chiết DNA.

Danh sách các hóa chất và vai trò của nó được liệt kê trong bảng dưới đây,

 

Hóa chất sử dụng
Tris Bộ đệm tách chiết DNA, bộ đệm rửa giải DNA
EDTA Bộ đệm tách chiết DNA, bộ đệm rửa giải DNA
SDS Tách chiết DNA (ly giải màng tế bào và màng nhân)
CTAB Tách chiết DNA (ly giải màng tế bào và màng nhân)
KCL Bộ đệm tách chiết DNA (tách DNA)
NaCl Kết tủa DNA và tách chiết DNA
MgCl2 Tách chiết DNA (bảo vệ DNA)
Nonidet P40 Chiết xuất DNA
Chelex Chiết xuất DNA
Phenol Kết tủa protein
Chloroform Ngăn chặn sự cắt đứt DNA
Isoamyl alcohol Tách DNA khỏi các tạp chất khác
Ethanol Sự kết tủa
Alcohol Rửa DNA
Proteinase K Tiêu hóa protein
Liquid nitrogen Làm vỡ mô thực vật
Axit boric Điện di trên gel agarose
Bột agarose Điện di trên gel agarose
A-xít a-xê-tic Điện di trên gel agarose
EtBr Điện di trên gel agarose
Bromophenol xanh lam Điện di trên gel agarose
NaOH Điều chỉnh độ pH
HCL Điều chỉnh độ pH
Beta mercaptoethanol Đệm tách chiết DNA, điều chế phenol

 

Đây là những hóa chất chung cần thiết trong bất kỳ phòng thí nghiệm tách chiết DNA nào.

Dụng cụ cho phòng thí nghiệm tách chiết DNA:

 

Giữa ánh sáng Nanodrop , QubitQIAGEN Qiaxpert , bạn có thể chọn bất kỳ một thiết bị nào, Tuy nhiên, một số phòng thí nghiệm thích sử dụng cả Nanodrop Light và Qubit.

Hình dưới đây là thiết lập chung của phòng thí nghiệm tách chiết DNA.

Phòng lab DNA

 

Tham khảo thêm bài viết: Thiết kế phòng lab sinh học phân tử

Bên ngoài phòng thí nghiệm tách chiết DNA:

Trước khi mẫu đưa vào phòng thí nghiệm tách chiết DNA, mẫu phải được dán nhãn và ghi vào hệ thống quản lý phòng thí nghiệm.

Để tạo ra mã duy nhất cho phòng thí nghiệm hoặc mã vạch duy nhất cho phòng thí nghiệm.

Ngoài ra, phòng thí nghiệm cũng có các phương tiện thu thập mẫu, trong trường hợp bệnh nhân trực tiếp đến phòng thí nghiệm. vì điều đó, chúng tôi có một ống tiêm, kim tiêm, bông, ống lấy máu và tinh thần bên ngoài phòng thí nghiệm.

Nếu mẫu là máu, mẫu phải được lấy trong lọ EDTA.

Thiết lập an toàn đám cháy phải có mặt bên ngoài phòng thí nghiệm.

Ngoài ra, phòng thí nghiệm phải được dán nhãn bằng các nhãn cần thiết.

Bắt đầu với việc chuẩn bị mẫu, mẫu phải được dán nhãn một lần nữa cho phòng thí nghiệm tách chiết DNA. Nơi này dành riêng cho việc chuẩn bị lấy mẫu và bổ sung các hóa chất khác.

Sau đó đặt máy ly tâm, nồi cách thủy và đỉnh cạnh khu vực chuẩn bị mẫu (xem hình vẽ).

Sau đó vào phía tiếp theo của phòng thí nghiệm, đặt cân trước, sau đó là tủ sấy, thiết bị điện di và đèn chiếu tia cực tím UV.

Tại trạm này, mẫu DNA chiết tách được điện di. Gel được chuẩn bị và DNA được chạy trên điện di trên gel agarose, DNA được phân tích dưới tia UV transilluminator.

Bên cạnh đó là phần định lượng DNA.

Sau khi điện di được thực hiện xong, mẫu được đưa đi định lượng. Tại đây, độ tinh khiết và số lượng của DNA chiết xuất được kiểm tra và sau đó nó được gửi đến trạm tiếp theo.

Bây giờ mẫu của chúng tôi đã sẵn sàng cho PCR và các ứng dụng hạ lưu khác. DNA được gửi đến kho lưu trữ (đông lạnh hoặc đông lạnh sâu). Từ mẫu, DNA của chúng tôi được chiết xuất, bây giờ DNA có thể gửi đến phần tiếp theo của phòng thí nghiệm di truyền của chúng tôi.

Bộ tổng quát của phòng thí nghiệm di truyền được thể hiện trong hình bên dưới,

Phòng thí nghiệm tách chiết DNA là một phần thiết yếu của phòng thí nghiệm di truyền. Bắt đầu với phòng thí nghiệm tách chiết DNA, nó mở vào phòng lưu trữ.

Kho chứa tủ đông lạnh, đông lạnh sâu và các giá để đồ tiện ích. một khi DNA được chiết xuất từ ​​phòng thí nghiệm tách chiết DNA, DNA được định lượng và lưu trữ ở dạng đông lạnh để bảo quản ngắn hạn và đông lạnh sâu để lưu trữ lâu dài.

Phòng bảo quản mở vào phòng chuẩn bị phản ứng. Phòng chuẩn bị phản ứng có trạm làm việc PCR, nơi các phản ứng PCR được chuẩn bị.

Phòng chuẩn bị phản ứng mở vào phòng bổ sung tiêu bản, nơi mẫu DNA được thêm vào phản ứng PCR và được đặt vào máy PCR.

Việc thiết lập được mô tả cho phòng thí nghiệm chiết xuất theo hướng dẫn NABL cho phòng thí nghiệm di truyền. Ở đây, theo hướng dẫn của NABL, phòng thí nghiệm di truyền về cơ bản yêu cầu một phòng bổ sung mẫu chuyên dụng.

Bởi vì trong phòng thí nghiệm chuẩn bị phản ứng và phòng thí nghiệm tách chiết DNA, khả năng lây nhiễm chéo là rất cao.

Lưu ý: Khu vực sau khuếch đại không được hiển thị trong hình trên.

Dụng cụ thủy tinh và dụng cụ nhựa cho phòng thí nghiệm tách chiết DNA:

Tất cả các tiện ích khác như đồ thủy tinh và đồ nhựa đều quan trọng và là những tiện ích chính. Bình 500ml, bình cầu 1000ml, ống đong 100ml, ống đong 1000ml và cốc là một số dụng cụ thủy tinh thường được sử dụng.

Cần có đầu tip 1ml, 200mcrolter, 10microliter và ống Eppendorf 2ml và 1,5ml trong phòng thí nghiệm tách chiết DNA.

Tiện ích khác

tính thiết thực

  • Pipette
  • Bộ dụng cụ tách chiết DNA (để sao lưu)
  • Nước cất
  • Giải pháp tách chiết DNA (sẵn sàng sử dụng cho tất cả các loại mẫu)
  • Sẵn sàng sử dụng bộ đệm TE (Sao lưu)
  • Sẵn sàng sử dụng đệm tải gel
  • Tủ lạnh
  • Tủ lạnh âm sâu
  • Lò vi sóng
  • Parafilm
  • Ống lấy máu
  • Ống tiêm và kim tiêm
  • Bông
  • Đèn cồn

Cần có thêm cốc nhựa để loại bỏ. Ngoài ra, hãy sử dụng loại bỏ riêng cho các hóa chất nguy hiểm như EtBragarose.

Hồ sơ và sổ đăng ký:

Theo hướng dẫn tiêu chuẩn, hồ sơ và sổ đăng ký là một phần quan trọng của phòng thí nghiệm tách chiết DNA hoặc di truyền. Duy trì hồ sơ của bệnh nhân, mẫu và thời gian tiến hành. Ngoài ra, tạo các sổ đăng ký như sổ đăng ký kho, sổ đăng ký mẫu, sổ đăng ký thuê ngoài, sổ đăng ký tiện ích, sổ đăng ký hóa chất và các sổ đăng ký kho khác.

Duy trì sổ đăng ký bằng cách nhập ngày sử dụng, ngày hoàn thành kho và ngày phân tích của dụng cụ. Tạo các tệp riêng biệt cho tất cả các hướng dẫn sử dụng của các nhạc cụ và các tài liệu khác.

Chúng tôi đã đề cập đến các bài viết về việc chuẩn bị các loại dung dịch khác nhau cho các loại phương pháp tách chiết DNA khác nhau.

Chuẩn bị hóa chất cho phương pháp tách chiết DNA bằng Phenol chloroform:

Tách chiết DNA bằng phenol-chloroform: Khái niệm cơ bản, chuẩn bị hóa chất và quy trình

Chuẩn bị dung dịch cho phương pháp tách chiết DNA CTAB:

Bộ đệm chiết tách DNA CTAB để tách chiết DNA thực vật

Chuẩn bị đệm TE:

Tầm quan trọng của đệm Tris-EDTA (TE) trong tách chiết DNA

Chuẩn bị đệm tách chiết DNA:

Làm thế nào để chuẩn bị đệm ly giải cho các loại phương pháp tách chiết DNA?

Hơn nữa, đối với việc mua nguồn dự phòng, hãy sẵn sàng sử dụng bộ dụng cụ tách chiết DNA, giải pháp tách chiết DNA, bộ đệm TAE và TBE, bộ đệm TE và các giải pháp khác để trong trường hợp thất bại trong quy trình hàng ngày, thời gian và mẫu của bạn không bị lãng phí.

Sự kết luận:

Tách chiết DNA là một trong những bước quan trọng trong quá trình phân tích sau PCR và PCR. Do đó, điều rất quan trọng là phải thiết lập một phòng thí nghiệm tách chiết DNA. Sản lượng và chất lượng của DNA phụ thuộc vào cấu trúc của phòng thí nghiệm tách chiết DNA. Hơn nữa, nó cũng phụ thuộc vào SOP (Cách bạn duy trì) và các giao thức (Cách bạn chuẩn hóa) của phòng thí nghiệm.

Hãy nhớ, luôn chuẩn bị các giao thức phòng thí nghiệm và SOP của riêng bạn.

Các chuyên gia của chúng tôi Ông Ravi Parmar là nhà huấn luyện NABL và ông Tushar Kachhadiya là chuyên gia về NABL, bạn có thể liên hệ với chúng tôi để được thiết lập phòng thí nghiệm di truyền. Để thiết lập phòng thí nghiệm Liên hệ với chúng tôi tại đây.

0901 681 202